違禁藥物是對(duì)人類(lèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有強(qiáng)烈興奮或抑制作用的化合物，主要包括阿片類(lèi)如嗎啡、 可卡因、 海洛因、 美沙酮，苯丙胺類(lèi)如苯丙胺、 甲基苯丙胺(冰毒)以及搖頭丸、 氯胺酮、 大麻類(lèi)等. 近年來(lái)，違禁藥物除部分用于麻醉、 鎮(zhèn)痛等醫(yī)用功能外，在娛樂(lè)場(chǎng)所和酒吧、 賓館等服務(wù)場(chǎng)所以及別墅等私密場(chǎng)所被大量使用. 調(diào)查顯示，2012年世界吸毒人口達(dá)到2.43億，而我國(guó)的違禁藥物使用量也急劇增加，區(qū)域范圍不斷擴(kuò)大，已嚴(yán)重危害人民的身心健康，破壞社會(huì)秩序.

　　人類(lèi)大量使用違禁藥物后，其母體化合物或代謝物會(huì)隨尿液、 糞便等進(jìn)入污水處理廠，但污水處理廠并沒(méi)有專(zhuān)門(mén)設(shè)置去除此類(lèi)物質(zhì)的措施，污水處理過(guò)程不能將其完全降解，因此已處理甚至未經(jīng)處理的污水中的違禁藥物及其代謝物會(huì)最終進(jìn)入河流、 湖泊等水環(huán)境. 大量研究指出，在污水、 地表水甚至飲用水中已檢測(cè)到此類(lèi)物質(zhì)的存在，并會(huì)對(duì)水生生物正常的生命活動(dòng)產(chǎn)生潛在的不利影響，破壞生態(tài)平衡. 因此，不少學(xué)者將其定義為新型環(huán)境污染物. 可見(jiàn)，違禁藥物的濫用已經(jīng)不只是社會(huì)問(wèn)題，更是一個(gè)不容忽視的嚴(yán)重環(huán)境問(wèn)題.

　　基于違禁藥物重要的社會(huì)和環(huán)境影響，其精確檢測(cè)和濫用量估算對(duì)流行病學(xué)和環(huán)境科學(xué)具有重要意義. 違禁藥物濫用量傳統(tǒng)的估算方法主要通過(guò)社會(huì)流行病學(xué)調(diào)查進(jìn)行，但該方法具有很大的局限性和不確定性. 近年來(lái)，環(huán)境科學(xué)界發(fā)展了污水流行病學(xué)方法，通過(guò)測(cè)定某個(gè)地區(qū)污水中違禁藥物的殘留濃度水平反算該地區(qū)違禁藥物的用量，具有客觀、 實(shí)時(shí)、 可對(duì)比等優(yōu)點(diǎn). 大量研究報(bào)道了用海洛因的代謝物6-單乙酰嗎啡(6-AM)、 可卡因的主要代謝物苯甲酰厄告寧(BE)、 美沙酮的主要代謝物2-亞乙基-1,5-二甲基-3,3-二苯基吡咯烷(EDDP)、 氯胺酮的主要代謝產(chǎn)物去甲氯胺酮(NK)以及未代謝的苯丙胺(AM)、 甲基苯丙胺(METH)、 搖頭丸(MDMA)、 氯胺酮(KET)等估算常見(jiàn)違禁藥物的污水流行病學(xué)方法. 但大部分違禁藥物及其代謝物在環(huán)境中通常以納克級(jí)每升的濃度水平存在，因此，研究高回收率的前處理方法和高靈敏度、 高選擇性的分析測(cè)定方法就顯得格外重要.

　　已有研究中，對(duì)環(huán)境水樣的前處理普遍采用固相萃取技術(shù)(solid phase extraction，SPE)，以達(dá)到凈化、 濃縮待測(cè)物的目的. 但不同學(xué)者選用的SPE前處理步驟、 條件以及SPE柱的類(lèi)型(如Oasis HLB、 Oasis MCX、 Oasis MAX)等不盡相同. 對(duì)常見(jiàn)違禁藥物的分析測(cè)定，大多數(shù)學(xué)者選用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS)，并通過(guò)采用內(nèi)標(biāo)法、 優(yōu)化色譜和質(zhì)譜條件等達(dá)到準(zhǔn)確定量的目的. 親水作用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(常用HILIC色譜柱，HILIC-LC-MS/MS)[17, 19, 23, 27]和反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(常用C18色譜柱，C18-LC-MS/MS)在已有研究中均有報(bào)道.

　　不同的前處理和分析條件下違禁藥物的分析效果(如回收率、 檢出限)有較大差異. 為提高待測(cè)物的回收率，本研究從SPE柱的類(lèi)型(常用Oasis HLB和Oasis MCX)、 樣品pH值和沖洗、 酸化、 復(fù)溶過(guò)程等方面對(duì)前處理?xiàng)l件進(jìn)行了優(yōu)化. 本研究還對(duì)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)的兩種分析方法HILIC/C18-UPLC-MS/MS的質(zhì)譜、 色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，并用基質(zhì)效應(yīng)、 回收率、 準(zhǔn)確度和精密度、 檢出限和定量限、 線(xiàn)性和范圍等指標(biāo)對(duì)HILIC法和C18法進(jìn)行了評(píng)價(jià)，確定了最優(yōu)的SPE前處理?xiàng)l件和適用于常見(jiàn)違禁藥物分析檢測(cè)的UPLC-MS/MS方法. 通過(guò)分析北京市污水中的常見(jiàn)違禁藥物，對(duì)優(yōu)化的方法進(jìn)行了驗(yàn)證，以期為在中國(guó)全面開(kāi)展違禁藥物的污水流行病學(xué)研究及評(píng)價(jià)違禁藥物的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)奠定扎實(shí)的基礎(chǔ).

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　違禁藥物的標(biāo)準(zhǔn)樣品和氘代內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液均購(gòu)自美國(guó)的Cerilliant公司 (Round Rock,TX,USA). 其中標(biāo)準(zhǔn)樣品包括嗎啡(MOR,100 μg·mL-1)、 可卡因(COC,100 μg·mL-1)、 苯甲酰厄告寧(BE,100 μg·mL-1)、 可待因(COD,100 μg·mL-1)、 6-乙酰嗎啡(6-AM,100 μg·mL-1)、 美沙酮(MTD,100 μg·mL-1)、 2-亞乙基-1,5-二甲基-3,3-二苯基吡咯烷(EDDP,100 μg·mL-1)、 苯丙胺(AM,10 μg·mL-1)、 甲基苯丙胺(METH,100 μg·mL-1)、 搖頭丸(MDMA,75 μg·mL-1)及其代謝物(MDA,100 μg·mL-1)、 氯胺酮(KET,100 μg·mL-1)、 去甲氯胺酮(NK,100 μg·mL-1); 氘代內(nèi)標(biāo)包括MOR-D6，COC-D3、 BE-D3、 COD-D6、 6-AM-D6、 MTD-D9、 EDDP-D3、 AM-D8、 METH-D8、 MDMA-D5、 MDA-D5、 KET-D4、 NK-D4(均為10 μg·mL-1).

　　主要試劑：正己烷、 氨水、 鹽酸(均為分析純)，甲醇(優(yōu)級(jí)純)，醋酸銨、 甲酸、 甲酸銨、 乙腈(均為液相色譜級(jí)).

　　主要儀器：固相萃取裝置(12位固相萃取裝置，CNW科技公司)，SPE柱(Oasis MCX和Oasis HLB，均為60 mg 3 mL，購(gòu)自Waters)，氮吹儀，漩渦振蕩儀，離心機(jī)，超聲儀，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(色譜儀Waters ACQUITY UPLC，質(zhì)譜儀AB Sciex Triple Quad 6500).

　　1.2 測(cè)定方法

　　1.2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

　　根據(jù)待測(cè)物的性質(zhì)，選擇電噴霧離子源正離子模式ESI(+). 由待測(cè)物及其氘代化合物的分子量，設(shè)置掃描的荷質(zhì)比m/z范圍，尋找待測(cè)物母離子，并優(yōu)化去簇電壓(declustering potential,DP)，得到最大母離子響應(yīng). 進(jìn)行子離子掃描時(shí)，選擇相應(yīng)的母離子進(jìn)行打碎，手動(dòng)調(diào)節(jié)和優(yōu)化碰撞能量(collision energy,CE)，使母離子的強(qiáng)度為圖譜中基峰強(qiáng)度的1/4~1/3，得到最佳響應(yīng)的子離子對(duì)，其中每個(gè)待測(cè)化合物最大豐度的離子對(duì)作為定量離子，另一離子對(duì)作為定性離子.

　　1.2.2 色譜條件的優(yōu)化

　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)HILIC法和C18法的流動(dòng)相、 洗脫方式等進(jìn)行了優(yōu)化. 綜合考慮洗脫能力、 極性等因素，實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為有機(jī)流動(dòng)相. 為保證待測(cè)物的正電離，在有機(jī)相和水相中加入一定濃度的甲酸或甲酸銨以改善峰型. 為縮短分析周期、 提高分離能力和靈敏度等，本實(shí)驗(yàn)采用梯度洗脫的方式.

　　1.3 前處理方法

        1.3.1 Oasis MCX固相萃取

　　①樣品過(guò)濾：50 mL污水樣品過(guò)玻璃纖維濾膜; ②MCX柱活化：依次加入6 mL甲醇、 4 mL超純水和4 mL pH=2的超純水，流速1~2mL·min-1; ③內(nèi)標(biāo)的添加：已過(guò)濾水樣中添加13種違禁藥品的混合內(nèi)標(biāo)，靜置3~5 min充分混勻; ④樣品的加載：加載已添加混合內(nèi)標(biāo)的樣品，流速1~2mL·min-1; ⑤干燥：真空泵持續(xù)抽氣15~40 min直至SPE柱干燥; ⑥洗脫：依次用4 mL甲醇和4 mL氨水/甲醇溶液(5/100，質(zhì)量比)洗脫干燥的MCX柱，流速1~2mL·min-1; ⑦樣品濃縮：緩和的氮?dú)饬鞔迪疵撘海�直至吹�? ⑧復(fù)溶：若最終濃縮液選用HILIC-UPLC-MS/MS測(cè)定，需用200 μL乙腈復(fù)溶氮吹殘留物; 若最終濃縮液選用C18-UPLC-MS/MS測(cè)定，需用100 μL乙腈+100 μL 5 mmol·L-1乙酸銨復(fù)溶氮吹殘留物; ⑨復(fù)溶液過(guò)濾：0.22 μL離心過(guò)濾管過(guò)濾復(fù)溶后的樣品，濾液裝入U(xiǎn)PLC-MS/MS專(zhuān)用樣品瓶，4℃下保存，以備上機(jī)測(cè)定.

　　1.3.2 Oasis HLB固相萃取

　　與Oasis MCX固相萃取方法基本相同，不同之處在于②HLB柱活化：依次加入6 mL甲醇、 6 mL超純水，流速1~2mL·min-1; ⑥洗脫：8 mL甲醇洗脫干燥的HLB柱，流速1~2mL·min-1.

　　1.4 方法評(píng)價(jià)

　　參照ICH (International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) 指南，選取回收率、 基質(zhì)效應(yīng)、 準(zhǔn)確度(一般用回收率表示)、 精密度(日內(nèi)和日間精密度)、 檢出限、 定量限以及線(xiàn)性和范圍等指標(biāo)對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià).

　　1.4.1 回收率

　　分別取20、 100和200 μL的100 ng·mL-1混標(biāo)注入50 mL pH=2的超純水中，保證復(fù)溶后溶液中違禁藥物的濃度基本覆蓋其在實(shí)際污水中的檢出濃度. 比較MCX固相萃取前后各待測(cè)物的濃度，得到13種待測(cè)物在不同濃度梯度下的回收率.

　　1.4.2 基質(zhì)效應(yīng)

　　選取北京市肖家河污水處理廠進(jìn)水作為基質(zhì)效應(yīng)的供試水樣，分別取20、 100和200 μL的100 ng·mL-1混標(biāo)注入50 mL水樣中得到加標(biāo)水樣，不加標(biāo)的水樣作為空白水樣，經(jīng)過(guò)MCX固相萃取和UPLC-MS/MS分析測(cè)定，比較各待測(cè)物在不同濃度梯度下加標(biāo)水樣與空白水樣的檢測(cè)濃度之差和其在相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品中的檢測(cè)濃度，評(píng)價(jià)基質(zhì)對(duì)信號(hào)的抑制或加強(qiáng)效應(yīng).

　　1.4.3 檢出限和定量限

　　按照ICH的規(guī)定，儀器檢出限(ILOD)和定量限(ILOQ)分別以3倍信噪比(3S/N)和10倍信噪比(10S/N)確定. 0.01、 0.05、 0.1和0.5 ng·mL-1等低濃度混標(biāo)上機(jī)測(cè)定，S/N為3時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度為儀器檢出限，S/N為10時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度為儀器定量限. 方法檢出限(MLOD)和定量限(MLOQ)通過(guò)以下公式計(jì)算得到：

　　式中，200 μL為上機(jī)濃縮液的體積，50 mL為SPE前處理所取污水樣的體積.

　　1.4.4 線(xiàn)性和范圍

　　基于已報(bào)道的實(shí)際污水樣品中各待測(cè)違禁藥物的濃度水平，向乙腈中加入不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和固定體積(50 μL)的氘代內(nèi)標(biāo)混合溶液(100 ng·mL-1)，得到濃度范圍為0.01~200 ng·mL-1的系列混合工作溶液.

　　1.4.5 精密度

　　已加入10 ng混標(biāo)的pH=2超純水經(jīng)過(guò)前處理后，一日內(nèi)平行進(jìn)樣3次，評(píng)價(jià)方法的日內(nèi)精密度; 已加入10 ng混標(biāo)的pH=2超純水連續(xù)3個(gè)工作日進(jìn)行樣品前處理并上機(jī)測(cè)定，評(píng)價(jià)方法的日間精密度. 日內(nèi)和日間精密度均用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示，15%的RSD和不精確度作為方法可接受的標(biāo)準(zhǔn)上限.

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 優(yōu)化后的色譜條件

　　2.1.1 HILIC-UPLC-MS/MS優(yōu)化后的色譜條件

　　色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH-HILIC色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm). 優(yōu)化流動(dòng)相時(shí)，在有機(jī)相和水相中加入一定濃度的甲酸后，所得峰仍有拖尾現(xiàn)象，再加入甲酸銨后峰型得到明顯改善，優(yōu)化后的流動(dòng)相條件為10 mmol·L-1甲酸銨0.2%甲酸水溶液(A相)、 90%乙腈+10 mmol·L-1甲酸銨0.2%甲酸水溶液(B相). 洗脫梯度見(jiàn)表 1，該洗脫條件明顯縮短了分析周期，提高了分離能力和靈敏度. 優(yōu)化后的流速為0.4mL·min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為1 μL.

 

　　表 1 HILIC-UPLC-MS/MS流動(dòng)相洗脫梯度

　　2.1.2 C18-UPLC-MS/MS優(yōu)化后的色譜條件

　　色譜柱為Waters ACQUITY UPLC CSH-C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm). 在優(yōu)化流動(dòng)相時(shí)，向有機(jī)相和水相中加入一定濃度的甲酸，即可得到理想峰型，優(yōu)化后的流動(dòng)相條件為0.1%甲酸水溶液(A相)、 乙腈+0.1%甲酸(B相)，洗脫梯度見(jiàn)表 2，流速為0.4mL·min-1，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為1 μL.

　　

　　表 2 C18-UPLC-MS/MS流動(dòng)相洗脫梯度

　　2.2 優(yōu)化后的質(zhì)譜條件

　　HILIC/C18-UPLC-MS/MS兩種檢測(cè)方法均采用電噴霧離子源(ESI)，通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM)對(duì)所有待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè). 離子化模式：ESI(+)，離子源電壓(IS)：5 500 V，離子源溫度(TEM)： 550℃，氣簾氣(CUR)壓力：35psi，干燥氣(GS1)和輔助氣(GS2)壓力均為50psi，碰撞池氣壓(CAD)：9psi，去簇電壓(DP)：30 V，HILIC法和C18法的待測(cè)物及其相應(yīng)內(nèi)標(biāo)的母離子和定量、 定性離子荷質(zhì)比(m/z)及保留時(shí)間(RT)、 碰撞電壓(CE)等參數(shù)見(jiàn)表 3.　　

　

項(xiàng)目		母離子	定量離子		定性離子		RT /min
		m/z	m/z	CE/V	m/z	CE/V
METH	HILIC C18	150.1	91.0	26	119.1	16	1.68 1.26
METH-D8	HILIC C18	158.1	93.2	27	—	—	1.68 1.26
AM	HILIC C18	136.1	91.0	23	119.1	13	1.68 1.17
AM-D8	HILIC C18	144.1	97.1	23	—	—	1.68 1.17
KET	HILIC C18	238.2	125.1	40	207.1	20	1.26 1.48
KET-D4	HILIC C18	242.1	129.1	38	—	—	1.26 1.48
MOR	HILIC C18	286.1	181.1	48	201.1	37	2.23 0.64
MOR-D6	HILIC C18	292.1	181.1	51	—	—	2.23 0.64
6-AM	HILIC C18	328.1	211.1	37	165.0	52	1.80 1.27
6-AM-D6	HILIC C18	334.2	211.2	38	—	—	1.80 1.27
COC	HILIC C18	304.0	182.1	28	150.1	34	1.64 1.76
COC-D3	HILIC C18	307.1	185.1	28	—	—	1.64 1.76
MDMA	HILIC C18	194.0	163.1	18	105.0	34	1.65 1.30
MDMA-D5	HILIC C18	199.1	165.0	19	—	—	1.65 1.30
COD	HILIC C18	300.1	165.0	60	153.0	60	2.12 1.12
COD-D6	HILIC C18	306.2	165.2	58	—	—	2.12 1.12
MTD	HILIC C18	310.0	265.2	22	105.2	37	1.41 2.57
MTD-D9	HILIC C18	319.3	268.2	22	—	—	1.41 2.57
BE	HILIC C18	290.1	168.1	27	105.1	41	2.02 1.77
BE-D3	HILIC C18	293.2	171.2	29	—	—	2.02 1.77
NK	HILIC C18	224.1	125.0	35	125.0	23	0.95 1.43
NK-D4	HILIC C18	228.1	129.1	35	—	—	0.95 1.43
EDDP	HILIC C18	278.1	234.1	42	249.2	34	1.43 2.35
EDDP-D3	HILIC C18	281.2	234.2	44	—	—	1.43 2.35
MDA	HILIC C18	180.0	163.1	14	—	—	1.65 1.23
MDA-D5	HILIC C18	185.1	168.0	19	—	—	1.65 1.23

　　表 3 待測(cè)物HILIC/C18-UPLC-MS/MS的質(zhì)譜參數(shù)

　　由表 3中各待測(cè)物的保留時(shí)間RT可知，HILIC法得到的METH與AM保留時(shí)間均為1.68 min，MDMA與MDA保留時(shí)間均為1.65 min，MTD的保留時(shí)間1.41 min與EDDP的保留時(shí)間1.43 min相近，而C18法得到的所有待測(cè)物的保留時(shí)間相差較大. 圖 1 HILIC法和C18法的色譜圖描述了13種違禁藥物的出峰情況，從出峰時(shí)間來(lái)看，C18法能更好地分離待測(cè)物.

　

圖 1 13種違禁藥物的HILIC-UPLC-MS/MS和C18-UPLC-MS/MS色譜圖

　　2.3 優(yōu)化后的SPE前處理?xiàng)l件2.3.1 SPE柱和樣品pH值對(duì)待測(cè)物回收率的影響

　　本實(shí)驗(yàn)選用環(huán)境水樣SPE前處理應(yīng)用較為廣泛的Oasis HLB柱和Oasis MCX柱，研究SPE柱對(duì)待測(cè)違禁藥物回收率的影響. 對(duì)HLB柱而言，分別將pH值為2、 7、 11的超純水過(guò)柱，按照1.3.2節(jié)中HLB固相萃取方法進(jìn)行前處理，比較樣品pH值對(duì)待測(cè)藥物回收率的影響. 而對(duì)MCX柱而言，只將pH值為2的超純水過(guò)柱，按照1.3.1節(jié)中Oasis MCX固相萃取方法進(jìn)行前處理.

　　由表 4可知，用HILIC法和C18法得到的13種待測(cè)物在不同SPE柱和樣品pH值條件下的回收率基本相同，均具有一致的變化規(guī)律. HLB柱在樣品pH值為2、 7、 11時(shí)會(huì)顯著影響METH、 AM、 MOR、 COC、 COD、 MTD、 EDDP等物質(zhì)的回收率，且METH、 AM、 MOR在樣品pH=2以及EDDP在樣品pH為2、 7、 11時(shí)的回收率均不在80%~120%之間.可見(jiàn)，用Oasis HLB柱前處理得到的大多數(shù)待測(cè)物回收率受水樣pH值影響較大，且不同違禁藥物需要的最佳樣品pH值不同，因此不適合用Oasis HLB柱前處理水樣以進(jìn)行多種常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物的同步測(cè)定. 相反，用Oasis MCX柱前處理pH=2樣品所得的13種待測(cè)物回收率均在80%~120%之間，故將Oasis MCX柱作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)及今后實(shí)際污水樣品前處理的理想SPE柱. 違禁藥物用Oasis HLB和Oasis MCX柱進(jìn)行SPE前處理所得回收率不同的原因，可能是兩種SPE柱的吸附劑(填料)不同所致，其中Oasis HLB柱為親水-親酯吸附劑，極性基團(tuán)可增加對(duì)極性物質(zhì)的保留; Oasis MCX柱為混合型強(qiáng)陽(yáng)離子交換、 水可浸潤(rùn)性聚合物吸附劑，對(duì)堿性化合物具有較高的選擇性和靈敏度. 而所測(cè)違禁藥物均具有含N的堿性基團(tuán)，更適合用Oasis MCX柱進(jìn)行SPE前處理.

　

項(xiàng)目		HLB		MCX
		pH=2	pH=7	pH=11	pH=2
METH	HILIC	58.57±7.52	76.30±3.15	71.97±2.02	87.07±0.46
	C18	64.10±7.76	81.17±6.45	81.33±2.41	90.30±2.72
AM	HILIC	30.80±4.01	87.77±4.56	93.90±2.31	93.80±1.21
	C18	32.40±3.99	88.40±5.46	94.93±1.91	91.30±0.85
KET	HILIC	117.63±5.46	110.93±0.45	104.17±3.17	105.43±5.69
	C18	117.77±12.42	111.63±2.15	101.13±1.34	101.33±0.35
MOR	HILIC	47.67±5.84	115.33±2.80	201.15±4.03	114.43±3.02
	C18	47.60±7.20	106.37±5.95	217.03±28.75	122.43±4.88
6-AM	HILIC	117.03±3.95	104.20±2.52	114.57±3.31	94.60±3.61
	C18	125.63±7.61	102.60±6.20	115.27±3.59	96.20±3.41
COC	HILIC	99.00±13.53	118.23±3.89	84.77±3.12	87.63±3.62
	C18	109.27±12.39	134.00±10.23	95.07±2.27	98.77±3.07
MDMA	HILIC	124.15±2.05	107.97±1.85	104.63±2.78	113.93±3.09
	C18	125.00±1.84	111.47±1.63	108.80±5.41	116.37±3.35
COD	HILIC	106.43±9.14	105.27±6.78	83.40±1.55	91.83±2.83
	C18	104.73±10.43	107.10±3.72	83.27±4.04	89.87±2.18
MTD	HILIC	109.35±9.97	113.10±4.41	87.40±5.88	108.57±5.02
	C18	100.07±12.97	99.70±5.57	74.73±6.05	84.73±3.26
BE	HILIC	93.73±11.47	87.57±1.60	87.97±3.35	84.53±3.65
	C18	93.31±11.41	81.58±1.54	86.31±2.69	86.08±5.96
NK	HILIC	104.97±10.48	93.60±1.01	95.17±0.35	94.60±0.82
	C18	92.77±9.51	88.37±0.72	89.23±0.93	85.43±1.70
EDDP	HILIC	124.20±24.61	276.00±12.73	173.33±8.95	109.97±7.53
	C18	115.05±23.41	264.00±11.31	166.20±16.69	101.37±5.12
MDA	HILIC	93.33±9.60	84.40±1.05	85.33±2.05	87.93±1.33
	C18	99.17±12.13	92.13±0.21	93.63±4.01	92.23±1.82

　　表 4 不同SPE柱和水樣pH值條件下的待測(cè)物回收率比較%

　　2.3.2 樣品濃縮過(guò)程中酸化對(duì)待測(cè)物回收率的影響

　　根據(jù)1.3.1節(jié)中Oasis MCX固相萃取方法，在洗脫液氮吹濃縮過(guò)程中，當(dāng)洗脫液為1 mL左右時(shí)分別加入0、 200、 400、 600 μL鹽酸/甲醇溶液(5/95，體積比)，研究酸化過(guò)程對(duì)待測(cè)物回收率的影響.

　　由表 5不同酸化條件下待測(cè)物的回收率可知，樣品濃縮過(guò)程中是否酸化及酸化程度對(duì)13種待測(cè)物的回收率影響不大，說(shuō)明氮吹過(guò)程不會(huì)因待測(cè)物的揮發(fā)而顯著影響其回收率. 因此，實(shí)驗(yàn)認(rèn)為樣品濃縮過(guò)程無(wú)需進(jìn)行酸化處理.

　　

項(xiàng)目		HCl/CH 3 OH (5/95)的體積/μL
		0	200	400	600
METH	HILIC	85.10±3.93	89.50±3.70	82.40±1.74	84.30±1.60
	C18	101.37±9.00	93.57±3.26	87.37±1.81	90.20±0.95
AM	HILIC	96.23±3.44	101.07±0.55	96.83±1.29	99.57±1.17
	C18	102.53±3.91	90.27±4.10	86.73±1.36	89.63±1.37
KET	HILIC	137.70±11.06	110.00±9.48	112.90±7.35	119.80±5.51
	C18	108.97±6.65	105.13±5.78	98.80±1.85	99.43±4.14
MOR	HILIC	104.70±4.08	112.10±3.11	109.10±0.00	118.85±1.34
	C18	106.77±4.84	109.10±0.00	113.90±0.00	114.00±3.39
6-AM	HILIC	102.43±5.25	97.57±4.58	104.13±5.52	96.80±1.70
	C18	101.50±5.34	97.30±0.00	88.60±0.00	96.70±2.97
COC	HILIC	88.50±4.22	88.23±6.92	80.90±4.69	83.83±4.12
	C18	99.50±4.56	98.03±7.17	91.07±3.93	94.87±5.74
MDMA	HILIC	117.40±6.30	116.50±3.28	112.10±2.18	116.70±2.21
	C18	122.40±2.83	118.03±3.52	113.53±3.46	115.23±0.70
COD	HILIC	95.90±6.18	95.60±1.85	91.63±1.70	94.27±2.68
	C18	98.10±6.24	92.57±6.53	84.70±3.76	87.87±3.84
MTD	HILIC	112.10±6.70	115.40±14.22	100.97±3.65	109.70±7.01
	C18	87.20±5.56	88.40±8.87	77.77±3.74	84.17±4.11
BE	HILIC	76.43±5.01	85.00±0.98	84.00±5.91	82.73±3.57
	C18	95.01±4.47	91.34±5.65	88.24±8.94	84.61±2.75
NK	HILIC	104.57±6.50	98.97±3.48	93.83±1.62	96.57±1.59
	C18	94.53±5.06	88.13±4.27	84.03±1.85	86.23±1.80
EDDP	HILIC	109.03±6.72	103.50±6.08	91.30±3.08	104.03±7.42
	C18	99.40±5.46	89.43±10.95	84.60±22.19	92.30±0.28
MDA	HILIC	95.37±4.63	89.77±3.91	83.83±1.25	86.03±2.58
	C18	101.77±4.50	95.93±4.84	91.03±1.14	91.97±0.81

　　表 5 不同酸化條件下的待測(cè)物回收率比較/%

　　2.3.3 沖洗步驟對(duì)待測(cè)物回收率的影響

　　根據(jù)1.3.1節(jié)中Oasis MCX固相萃取方法，在樣品加載完之后，分別設(shè)置3 mL 超純水、 3 mL 正己烷沖洗Oasis MCX柱和無(wú)沖洗3組對(duì)照實(shí)驗(yàn)，研究沖洗步驟對(duì)待測(cè)藥物回收率的影響.

　　由表 6不同沖洗條件下待測(cè)物的回收率可知，除無(wú)沖洗和水洗MCX柱條件下得到的COC回收率較低外，是否沖洗MCX柱及不同沖洗試劑的沖洗對(duì)其它12種待測(cè)物回收率沒(méi)有顯著影響，因此，樣品前處理過(guò)程無(wú)需進(jìn)行MCX柱的沖洗.

 

前處理步驟		沖洗步驟			復(fù)溶步驟
試劑		無(wú)	水	正己烷	200μL乙腈	100μL乙腈+100μL乙酸銨	400μL乙腈
METH	HILIC	87.70±1.18	84.67±1.19	89.87±6.88	85.27±0.91	84.43±1.78	86.60±2.55
	C18	96.50±4.03	95.23±2.66	101.33±12.36	92.80±3.91	92.70±2.95	92.67±2.12
AM	HILIC	101.47±0.85	100.63±0.58	101.80±5.89	96.30±3.50	96.67±2.94	97.33±1.17
	C18	95.70±3.46	95.80±2.95	101.40±11.27	88.30±9.83	94.67±6.90	96.40±4.97
KET	HILIC	113.40±3.15	114.23±6.90	115.27±7.34	104.90±7.21	100.63±5.14	100.13±5.53
	C18	114.13±6.45	108.00±6.36	115.10±6.07	104.40±6.35	96.53±4.48	104.23±3.28
MOR	HILIC	118.40±4.59	116.20±4.27	118.43±7.29	114.53±5.05	115.20±1.30	116.63±2.50
	C18	111.17±1.20	116.90±0.00	114.47±4.97	106.63±8.03	130.97±7.12	118.40±2.86
6-AM	HILIC	97.27±5.66	93.50±2.01	104.07±11.89	95.77±1.76	96.50±2.54	97.57±0.93
	C18	93.83±4.38	96.33±6.29	107.40±7.53	99.83±4.84	101.00±3.57	96.47±5.44
COC	HILIC	61.67±4.20	59.53±2.84	90.00±3.50	88.57±8.93	84.17±3.44	85.55±6.43
	C18	69.23±4.25	66.53±2.95	100.53±4.26	98.13±8.15	92.63±5.30	92.40±7.03
MDMA	HILIC	115.73±0.85	109.80±2.76	110.30±0.57	109.50±4.89	109.67±3.72	111.77±2.91
	C18	114.53±6.15	114.67±4.21	115.35±0.21	113.47±2.27	114.73±2.90	115.87±1.91
COD	HILIC	96.37±4.84	92.43±4.48	100.07±7.91	91.73±4.71	89.50±4.40	91.50±2.00
	C18	97.50±6.60	96.13±3.47	99.13±9.51	92.67±5.81	73.97±5.06	90.73±4.61
MTD	HILIC	121.23±8.09	118.50±3.73	115.80±2.96	114.90±7.82	110.10±7.16	109.70±7.41
	C18	102.03±7.26	96.17±6.46	96.87±1.50	94.83±10.40	85.90±7.35	89.57±9.77
BE	HILIC	116.30±3.45	116.13±8.20	103.20±10.29	96.97±12.81	83.07±3.07	87.53±4.24
	C18	116.38±2.81	120.18±13.82	107.44±16.89	98.18±9.23	91.08±4.52	89.64±3.88
NK	HILIC	103.23±4.25	99.73±4.32	108.47±9.92	97.73±3.05	96.77±7.36	94.80±1.65
	C18	92.07±3.13	89.90±3.70	97.03±9.07	88.43±1.59	86.53±3.61	88.20±3.12
EDDP	HILIC	142.85±14.64	125.00±11.31	120.95±22.27	121.45±21.43	106.90±9.85	113.50±18.81
	C18	113.10±2.97	101.93±14.35	108.57±19.18	112.80±20.36	99.63±9.20	105.50±17.54
MDA	HILIC	90.40±3.74	88.57±2.61	98.47±11.96	88.60±2.92	87.30±4.73	85.67±1.10
	C18	98.77±4.04	96.33±2.00	104.43±11.61	94.83±0.65	94.90±2.46	93.17±1.16

表 6 不同洗脫和復(fù)溶條件下的待測(cè)物回收率比較/%

　　

　　2.3.3 沖洗步驟對(duì)待測(cè)物回收率的影響

       根據(jù)1.3.1節(jié)中Oasis MCX固相萃取方法，在復(fù)溶過(guò)程中設(shè)置3組對(duì)照實(shí)驗(yàn)：①200 μL乙腈復(fù)溶氮吹殘留物1 min; ②先用100 μL乙腈復(fù)溶30 s，再加入100 μL 5 mmol·L-1乙酸銨超純水溶液復(fù)溶30 s; ③400μL乙腈復(fù)溶氮吹殘留物1 min.

　　由表 6不同復(fù)溶條件下待測(cè)物的回收率可知，不同組成和量的溶劑復(fù)溶氮吹殘留物，濃縮液用HILIC法和C18法測(cè)得的待測(cè)物回收率沒(méi)有顯著差別. 但C18法色譜圖顯示，用200 μL和400 μL乙腈復(fù)溶得到的KET、 MOR、 NK色譜圖均有兩個(gè)強(qiáng)峰，分別在1.35 min和1.48 min處、 0.63 min和0.66 min處、 1.27 min和1.43 min處，這是上機(jī)的溶液中有機(jī)相的比例太高而出現(xiàn)溶劑效應(yīng)所致，而用有機(jī)相比例較低的100 μL乙腈+100 μL 5 mmol·L-1乙酸銨復(fù)溶得到的KET、 MOR、 NK色譜圖均有一個(gè)峰，分別在1.48、 0.63、 1.43 min處. 因此，若選用HILIC法測(cè)定常見(jiàn)違禁藥物及其待測(cè)物，可選用200μL乙腈復(fù)溶; 若選用C18法測(cè)定常見(jiàn)違禁藥物及其待測(cè)物，需選用100 μL乙腈+100 μL 5 mmol·L-1乙酸銨復(fù)溶.

　　2.4 已優(yōu)化方法的評(píng)價(jià)

　　2.4.1 回收率和基質(zhì)效應(yīng)

　　由表 7可知，HILIC法和C18法測(cè)定的回收率和基質(zhì)效應(yīng)均基本處于80%~120%之間，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)選用MCX固相萃取的前處理方法是可行的. 但總體而言，C18法所得回收率和基質(zhì)效應(yīng)較HILIC法更接近于100%.

 

方法評(píng)價(jià)指標(biāo)		回收率			基質(zhì)效應(yīng)
加標(biāo)樣濃度		10 ng·mL -1	50ng·mL -1	100 ng·mL -1	10 ng·mL -1	50 ng·mL -1	100 ng·mL -1
METH	HILIC	80.95±3.64	82.9±0.61	84.22±2.05	82.39±5.23	100.23±0.51	92.90±1.28
	C18	90.00±7.33	86.80±0.56	88.17±1.83	95.19±12.78	100.71±2.20	100.97±5.74
AM	HILIC	109.22±8.30	95.43±0.93	97.28±1.17	77.80±2.80	105.18±6.51	107.16±4.04
	C18	105.23±4.82	90.20±2.05	92.73±1.30	92.54±5.48	108.02±3.49	106.70±0.57
KET	HILIC	112.33±5.35	108.07±4.40	109.00±3.04	103.70±1.46	109.65±2.77	97.44±0.52
	C18	94.78±9.40	95.70±0.85	97.57±2.08	98.70±2.60	110.99±2.74	105.09±1.40
MOR	HILIC	103.10±8.49	104.60±2.86	107.67±1.04	100.29±3.71	124.09±6.03	120.13±1.36
	C18	104.18±8.81	97.90±2.57	106.17±1.44	103.27±7.07	124.71±1.20	118.61±3.98
6-AM	HILIC	91.32±7.58	89.60±0.53	92.33±2.20	96.37±1.12	103.18±4.94	96.40±3.82
	C18	96.73±13.07	90.13±1.39	96.48±1.97	97.86±4.01	114.13±8.64	107.08±2.79
COC	HILIC	94.12±12.02	84.10±1.61	97.12±2.92	91.65±1.78	97.80±5.25	96.73±1.30
	C18	109.95±14.51	96.03±1.62	98.33±1.49	84.22±2.88	103.10±4.39	108.31±0.43
MDMA	HILIC	109.33±11.12	109.87±0.64	115.00±3.91	87.80±2.53	109.10±1.68	104.65±1.27
	C18	110.57±9.87	110.63±1.29	115.00±4.50	88.26±0.26	106.35±2.53	101.27±3.54
COD	HILIC	86.98±3.31	85.03±1.53	87.45±2.79	84.45±1.28	97.34±0.33	96.54±1.76
	C18	87.50±6.60	86.93±0.65	88.02±2.41	85.77±5.73	104.36±3.96	110.32±0.28
MTD	HILIC	101.10±7.64	102.47±1.07	126.17±3.33	98.64±6.06	97.81±3.38	104.67±0.00
	C18	87.43±3.39	83.53±0.50	94.83±2.62	110.39±1.06	117.36±6.59	110.17±4.33
BE	HILIC	120.33±12.00	87.40±6.36	84.75±3.46	99.92±10.82	104.12±4.10	91.87±2.10
	C18	106.88±4.48	88.74±7.13	89.74±3.73	105.13±5.24	108.87±3.64	99.87±2.01
NK	HILIC	92.00±8.01	91.67±0.51	92.18±1.80	92.01±1.97	101.69±3.42	100.99±1.86
	C18	85.70±3.67	88.27±1.38	87.65±2.19	105.94±1.99	112.02±1.46	110.01±0.76
EDDP	HILIC	98.18±7.48	96.37±1.43	111.50±5.68	88.33±2.32	101.64±5.47	89.90±2.70
	C18	90.67±7.40	89.43±1.14	99.47±2.10	108.26±32.93	95.53±1.16	116.65±9.36
MDA	HILIC	84.25±4.21	84.57±1.85	86.38±2.23	90.49±2.05	109.08±3.86	101.84±1.40
	C18	97.78±8.07	89.07±1.33	91.13±1.99	108.39±4.72	109.34±2.08	105.15±3.39

　　表 7 HILIC/C18-UPLC-MS/MS的回收率和基質(zhì)效應(yīng)比較/%

　　2.4.2 檢出限、 定量限、 線(xiàn)性和范圍及精密度

　　根據(jù)表 8兩種方法的比較結(jié)果，除COD和NK兩種待測(cè)物用C18法得到的LOD和LOQ高于HILIC法外，METH、 6-AM和MDA這3種待測(cè)物用C18法得到的LOD和LOQ均較低，且HILIC法測(cè)定MDA的方法LOQ達(dá)到20.00 ng·L-1，顯然高于其在大多數(shù)水環(huán)境中的濃度，故用HILIC法很可能掩蓋6-AM、 MDA等違禁藥物在水環(huán)境中的存在; 而AM、 KET等其它8種待測(cè)物用兩種方法得到的LOD和LOQ相同. HILIC法和C18法得到的所有待測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，且所有濃度水平基本可達(dá)到85%~115%的準(zhǔn)確度和RSD<15%的精密度，因此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可用于實(shí)際污水中常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物濃度的測(cè)定. 日內(nèi)和日間RSD均<2.5%，說(shuō)明儀器的穩(wěn)定性、 方法的重復(fù)性等都達(dá)到了理想的實(shí)驗(yàn)要求. 綜上，C18法較HILIC法更適合用于中國(guó)污水中違禁藥物的定量分析.

 

方法評(píng)價(jià)指標(biāo)		檢出限LOD		定量限LOQ		標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)		精密度
		儀器LOD /ng·mL -1	方法LOD /ng·L -1	儀器LOQ /ng·mL -1	方法LOQ /ng·L -1	相關(guān)系數(shù) ( r 2 )	線(xiàn)性范圍	日內(nèi)RSD /%	日間RSD /%
METH	HILIC	0.05	0.20	0.10	0.40	0.992 6	0.10~200	0.59	0.28
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 6	0.05~200	0.44	0.23
AM	HILIC	0.05	0.20	0.50	2.00	0.998 2	0.50~200	0.60	0.43
	C18	0.05	0.20	0.50	2.00	0.997 8	0.50~200	1.06	0.96
KET	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.995 7	0.01~200	0.35	0.63
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.998 3	0.01~200	0.55	0.73
MOR	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.998 2	0.05~200	0.51	0.61
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 7	0.05~200	0.97	0.44
6-AM	HILIC	0.05	0.20	0.10	0.40	0.998 3	0.10~200	1.05	0.60
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.996 4	0.05~200	1.91	0.48
COC	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.996 1	0.01~200	0.81	0.55
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.996 1	0.01~200	0.82	0.38
MDMA	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 7	0.01~200	0.40	0.49
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 2	0.01~200	1.37	0.97
COD	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.998 3	0.05~200	0.62	0.13
	C18	0.05	0.20	0.10	0.40	0.997 7	0.10~200	1.50	0.26
MTD	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 9	0.01~200	1.46	0.25
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.993 4	0.01~200	0.57	0.28
BE	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.996 0	0.01~200	0.25	2.03
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 8	0.01~200	0.15	0.56
NK	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.998 9	0.01~200	0.15	0.22
	C18	0.05	0.20	0.10	0.40	0.998 6	0.10~200	0.44	1.09
EDDP	HILIC	0.01	0.04	0.05	0.20	0.997 1	0.01~200	0.51	0.63
	C18	0.01	0.04	0.05	0.20	0.990 7	0.01~200	0.42	0.82
MDA	HILIC	0.50	2.00	5.00	20.00	0.997 6	5.00~200	0.81	0.35
	C18	0.10	0.40	0.50	2.00	0.998 9	0.50~200	0.75	0.95

　　表 8 HILIC/C18-UPLC-MS/MS的檢出限和定量限、 線(xiàn)性和范圍及精密度比較

　　3 檢測(cè)方法在實(shí)際污水樣品中的應(yīng)用

　　供試實(shí)際污水樣采自北京市12家污水處理廠，分別為北小河、 北苑、 盧溝橋、 高碑店、 酒仙橋、 小紅門(mén)、 吳家村、 永豐、 溫泉、 清河、 方莊和肖家河污水廠，總服務(wù)人口為1 114.6萬(wàn)，占北京市常住人口的51.4%; 污水總處理量為285.4萬(wàn)m3·d-1，其中最大處理量為95.0萬(wàn)m3·d-1(高碑店污水廠)，最小處理量為2.0萬(wàn)m3·d-1(永豐和溫泉污水廠). 污水樣采于2015年5月18~20日和6月2~3日，每個(gè)污水廠采樣兩天，進(jìn)、 出水同時(shí)采集，為自動(dòng)采樣器采集的24 h混合水樣.

　　根據(jù)2.3節(jié)中SPE前處理?xiàng)l件的優(yōu)化結(jié)果，實(shí)驗(yàn)選用1.3.1節(jié)中Oasis MCX固相萃取的步驟對(duì)北京污水樣進(jìn)行前處理. 由表 3待測(cè)物HILIC/C18-UPLC-MS/MS的質(zhì)譜參數(shù)中各待測(cè)物的保留時(shí)間RT可知，C18法對(duì)13種常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物的分離效果更好; 此外，表 7、 表 8中的方法評(píng)價(jià)指標(biāo)顯示，C18法具有較低的檢出限和定量限以及較為理想的回收率和基質(zhì)效應(yīng). 綜合考慮以上因素，實(shí)驗(yàn)選用C18法測(cè)定北京市污水廠進(jìn)、 出水中常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物的濃度，并計(jì)算其去除率.

　　結(jié)果表明，選用上述前處理和上機(jī)測(cè)定方法基本能準(zhǔn)確檢測(cè)所有常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物在污水廠進(jìn)、 出水中的濃度，能夠滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求. 其中，北京市污水廠進(jìn)水中METH、 MOR、 COD濃度較高，METH濃度范圍為17.44~305.60 ng·L-1，MOR濃度范圍為21.82~273.00 ng·L-1，COD濃度范圍為15.36~213.80 ng·L-1; 其次為AM 1.96~42.30 ng·L-1、 BE 1.30~15.70 ng·L-1、 6-AM 3.72~9.36 ng·L-1、 MDA 2.68~9.40 ng·L-1、 EDDP 1.00~24.60 ng·L-1; KET、 COC、 MDMA、 MTD和NK基本處于<5 ng·L-1的濃度水平. 北京市12家污水廠進(jìn)水中主要違禁藥物或代謝物的濃度見(jiàn)圖 2.

　　

圖 2 北京12家污水廠進(jìn)水中的主要違禁藥物或代謝物濃度

　　由表 9的去除率數(shù)據(jù)可知，METH、 MOR、 AM和COD的去除率較高，基本在85%以上; 其次為MDA，去除率基本在70%以上; 其它違禁藥物或代謝物的去除率均較低，甚至存在負(fù)去除的現(xiàn)象，如海洛因的代謝物6-AM、 可卡因的代謝物BE、 氯胺酮的代謝物NK以及COC、 MDMA等去除率較低，可能原因是違禁藥物在污水處理過(guò)程中進(jìn)一步分解為代謝產(chǎn)物，導(dǎo)致出水中代謝物的濃度偏高，或者同一污水廠進(jìn)水和出水的采樣時(shí)間不對(duì)應(yīng)，導(dǎo)致所采的出水并不是所采的進(jìn)水經(jīng)過(guò)處理后的對(duì)應(yīng)水樣. 此外，值得注意的是，出水水樣中待測(cè)物的濃度多為幾ng·L-1，與文獻(xiàn)報(bào)道的污水廠不能將違禁藥物及其代謝物完全去除的結(jié)論相符. 因此，污水廠出水中的違禁藥物或代謝物進(jìn)入河流、 湖泊等水環(huán)境，將會(huì)對(duì)生態(tài)平衡產(chǎn)生潛在的威脅.具體參見(jiàn)污水寶商城資料或http://www.dongaorq.cn更多相關(guān)技術(shù)文檔。

　

　　表 9 北京市12家污水廠對(duì)常見(jiàn)違禁藥物及其代謝物的去除率/%

　　4 結(jié)論

　　(1) SPE前處理?xiàng)l件的優(yōu)化結(jié)果表明，污水樣的前處理應(yīng)調(diào)水樣pH值為2，選用Oasis MCX柱，無(wú)需MCX柱的沖洗和氮吹過(guò)程的酸化步驟. 若選用C18-UPLC-MS/MS上機(jī)測(cè)樣，應(yīng)用100 μL乙腈+100 μL 5 mmol·L-1乙酸銨復(fù)溶氮吹殘留物; 若選用HILIC-UPLC-MS/MS上機(jī)測(cè)樣，可直接用200 μL乙腈復(fù)溶.

　　(2) 根據(jù)待測(cè)物的保留時(shí)間及檢出限、 定量限、 回收率和基質(zhì)效應(yīng)等方法評(píng)價(jià)指標(biāo)，用C18法所得結(jié)果具有分離效果更好、 檢出限和定量限更低、 回收率和基質(zhì)效應(yīng)更接近于100%等優(yōu)點(diǎn)，因此實(shí)驗(yàn)確定將C18-UPLC-MS/MS作為實(shí)際污水樣的理想測(cè)定方法.

　　(3) 前處理和上機(jī)測(cè)定方法在北京市12家污水廠的實(shí)際污水樣中得到應(yīng)用和驗(yàn)證，除個(gè)別去除率高的待測(cè)物在出水中未能檢出外，絕大多數(shù)待測(cè)物均被檢出并準(zhǔn)確定量. 其中，METH、 MOR、 COD在進(jìn)水中的濃度較高，METH、 MOR、 AM、 COD的去除率較高，而其它待測(cè)物的去除率較低甚至存在負(fù)去除的現(xiàn)象. 此外，污水廠出水中檢出了幾ng·L-1的違禁藥物及其代謝物，將對(duì)水環(huán)境的生態(tài)平衡構(gòu)成潛在威脅.